colesterol informe
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE COLESTEROL TOTAL
EN SUERO HUMANO
OBJETIVOS:
- o Conocer los fundamentos de la determinación de colesterol total en sangre por el método enzimático del colesterol oxidasa.
- o Determinar la concentración de colesterol total en la muestra problema. 5. Interpretar los resultados obtenidos.
- o Aplicar las normas de bioseguridad para el manejo de muestra de sangre y reactivos químicos
MATERIALES:
• Micropipetas de 10 µL y 1000 µL
• Tubos de prueba 5ml
• Gradillas
• Espectrofotómetro
• Puntas para micropipetas
• Reactivos del Colesterol total (CHOD-PAP)
Conservados entre 2° y 8°C. y protegidos de la luz, estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Composición del Reactivo Enzimático:
o Buffer Pipes pH 7.3 50 mM
o Colesterol ester hidrolasa >150 U/l
o Colesterol oxidasa (recombinante) >100 U/l
o Peroxidasa >1000 U/l
o 4-Aminoantipirina 0.4 mM
o Acido p-hidroxibenzoico 10 mM
o Azida sódica 0.1 g/dL
o Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.
El reactivo con el tiempo puede tomar un leve color rosado que no afecta los resultados. Descartar el reactivo si su absorbancia contra blanco de agua es superior a 0.4 D.O. a 505 nm
• Composición del Reactivo LDL:
• Citrato de sodio 60 Mm
• Heparina 100.000 U/L
• Composición del Reactivo HDL:
• Ácido fosfotúngstico 0,55 mM
• Cloruro de Magnesio 25 mM
PROCEDIMIENTO:
A. CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL TOTAL
- Llevar todos los reactivos a temperatura de trabajo en el laboratorio. Después de su uso refrigerarlos
- Rotular los 3 tubos: B=blanco, M=muestra, C=Calibrador
- Tener las siguientes recomendaciones para el tratamiento de la muestra, ya denotados en la práctica
- Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o temperatura ambiente (20° a 25°C).
- Calibrar el espectrofotómetro a una λ 505 nm
- Leer las absorbancias ajustando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo. El color resultante es estable por lo menos treinta minutos.
- Realizar los cálculos usando la siguiente fórmula:
B=blanco:0,00
M=muestra: 0,282
C=Calibrador: 0,308
RESULTADOS:
- Obtuvimos la observancia de cada tubo y obtuvimos los valores en el tubo B fue 0 , porque no hay muestra y no hay calibrador, Por otro lado en el tubo C calibrador: tiene una concentración 200mg/Dl .Para poder cuantificar el cuanto colesterol de una muestra tenemos que usar un calibrador con una concentración establecido
- Lego de medir la observancia con el espectrofotómetro pudimos determinar cualitativa mente en colesterol el resultado fue 183mg/dL
CONCLUSIONES:
- Teniendo en cuenta que los valores normales de HDL COLESTEROL el colesterol del paciente esta alto puede ser indicio de alguna patología.
- Para obtener este resultado se realizaron operaciones para hallar el colesterol
- Este tipo de colesterol se conoce como colesterol "bueno", y es un tipo de grasa en sangre que ayuda a eliminar el colesterol de la sangre, evitando la acumulación de grasa y la formación de placa.
CUESTIONARIO:
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